Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的步骤中逐渐扩展

从第一次浮现肝细胞自身HIV到浮现1型号乳癌医学病因的的发展部将在学童时期就有很好的阐述，多个肝细胞自身HIV白血病的学童中所有70%在胰岛素转换成后10短期内患上乳癌，而随访15年的学童这一%缩减到84%。比起之下，占有医学1型号乳癌一半以上的型号1型号乳癌的患病功能还没获取充分的深入研究。

越来越多的人开始常用分期子系统来定义1型号乳癌的的发展：生物棒状在浮现多种肝细胞自身HIV时踏入第1阶段，浮现胰岛素异常时踏入第2阶段，浮现病因时踏入第3阶段。一些多发肝细胞自身HIV白血病的生物棒状，在1期和2期，的发展较慢，并发展为患病的1型号乳癌。我们以后阐述了一第三组在首次核对到多种肝细胞自身HIV检验后多于10年无乳癌的较快的发展者，这第三组患儿人数少，但构造非常明确。随后，我们发现肝细胞自身抗原酪氨酸CD8+T细胞核重排将在的发展很慢的患儿中所基本不存有，但在近期患病和长期存有的乳癌患儿中所很越来越容易核对到。这可能会表明，与的发展患儿比起，这些患儿性疾病重排将的缓冲进一步提高。

20世纪深入研究表明，尽管缓冲性T细胞核(Treg)数量正常，但乳癌患儿存有一些功能缺失，其中所还包括对IL-2的重排将能力减小。此外，乳癌患儿中所的现象将CD4+T细胞核可能会对缓冲越来越具抵抗性，观感为现象将T细胞核的可抑制减弱，自然诱发的Treg和棒状外诱发的可借Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞核中所IL-2重排将减弱。本深入研究的最终目标是阐述了CD4+缓冲性T细胞核(Treg)在一小群极很慢的发展者中所的构造，他们的平均年岁为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以群体结合的纵向深入研究，在21岁以下肺炎的患儿亲属中所核对1型号乳癌的凶险诱因。我们以后阐述了长期很慢的发展者的构造，他们保持稳定多重肝细胞自身HIV白血病超过10年，但没浮现乳癌的医学病因，慢性或非来进行性性疾病。随后，10名继续保持稳定无乳癌并愿意提供大量血液检验的很慢的发展者扩展到T和B细胞核功能分析。在目前的深入研究中所，8名慢的发展者(SP第三组)，中所位年岁43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的肝细胞自身HIV白血病。所有的与会者都所处1型号乳癌的发展的1期，尽管一些人随后一落千丈了肝细胞自身HIV对某些抗原的白血病重排将，然而，一名患儿已经所处2期多于6年，但没浮现医学病因，一名患儿被诊断为乳癌，该受试者72岁，在挖掘科学研究检验时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中所对该供棒状来进行了原则上评估。分离外周血单个核细胞核(PBMCs)，改用多变量流式细胞核奥义和T细胞核可抑制试制评估供棒状中所Treg的kHz、遗传和功能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)来进行无委派聚类分析，评估Treg遗传。

结果：与身棒状健康供棒状比起，来自慢的发展棒状的清醒CD4+T细胞核的委派聚类表明，激活的清醒CD4+ TregkHz缩减，与糖皮质激素可借的TNFR相关蛋白(GITR)传达缩减有关。一名HbA1c升高的患儿与的发展很慢者和匹配的结果表明比起，Treg磬有所不同。功能于数，与身棒状健康供棒状比起，来自很慢的发展棒状的Treg介导的CD4+现象将T细胞核可抑制明显受损。观感为对现象将CD4+T细胞核CD25和CD134传达的可抑制缩减。

布1 深入的遗传分析表明，CD4+Treg亚型号在慢的发展配置文件中所缩减。由FlowSOM降解的Treg室，聚集地在来自所有供棒状的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据标识物传达鉴定出10个元簇:清醒T细胞核_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞核;HLA-DR + GITR +清醒T细胞核;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)常用9个不同Treg标识降解的10个元簇的MST。每个路由器象征性一个炮兵部队(100个炮兵部队)，越来越多的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在路由器第三组周围绘图。每个路由器中所的饼布透露单个标识的传达层次。(b)每个元聚类的热布，以表明整棒状标识传达。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)降解布，以及FlowSOM识别的每个元簇的孔洞。(e-l)比起总质量为每个metacluster筒本站布(总质量> 0.05%)确定为HD和SP第三组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞核(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞核(l)。黄色圆圈象征性捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对标识秩检验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 常用CITRUS的预测模型号证实，TregkHz的缩减是的发展很慢的标志。分级介导(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP与会者和匹配的HD与会者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的象征性性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR传达来进行分离，模拟器FlowSOM社群。(b) HD(黑点)和SP(白斑)第三组以及供棒状SP 606(黄色)中所CD25+ cd127的kHz简介布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+介导次开集的筒本站布;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，标识突出的簇被识别为SP和HD配置文件二者之间的不同。(j)筒本站布表明了在SP(白斑)和HD(灰点)第三组中所，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的比起总质量(%)。(k)直方布表明每个簇的遗传(粉色)和Treg标识比起传达与氛围传达(粉色);上列，闪存Treg_3;下面几天后，闪存Treg_4。氛围与所有其他簇中所标识的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对标识秩检验

布3 与身棒状健康献血者比起，的发展很慢者清醒treg的GITR缩减。每个清醒CD4+T细胞核元簇(清醒T细胞核_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞核;HLA-DR + GITR +清醒T细胞核;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)核对每个传达标识的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的传达热布(sp606不还包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中所所有HD(黑色)、所有SP(粉色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR传达串联，表明直方布(c)和简介布(d)。Wilcoxon配对标识秩和检验，p< 0.07(黄色)所有供棒状还包括，p< 0.05(粉色)供棒状SP 606和匹配的HD不还包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR传达，从分级介导，从所有HD(黑色)、所有SP(粉色)和SP 606(黄色)串联，表明直方布(e)和简介布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对标识秩检验

布4 来自很慢的发展的CD4+ treg细胞核控制现象将CD4+T细胞核的能力减小。SP第三组用粉色的本站和圆圈透露，HD第三组用金色的本站和圆圈透露，黄色的本站/圆圈透露供棒状sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核来进行分选。CD4+CD25−(应将答者)被标识为CFSE, Treg按推论的%硫酸铜。用抗CD3 /28微珠还原细胞核，培训3天后来进行流式细胞核奥义核对。(a-d)与CD4+应将答者比起应将的treg培训(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应将答者培训。(a,b,f) CFSE可抑制(a,e)和CFSE可抑制倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制倍数。常用白血病依此(激活的响应将细胞核都有treg)计算可抑制倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 现象将CD4+T细胞核对很慢的发展的T细胞核还原的可抑制越来越尖锐。SP第三组用粉色的本站和圆圈透露，HD第三组用金色的本站和圆圈透露，黄色的本站/圆圈透露供棒状sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核来进行分选。CD4+CD25−(应将答者)被cfsel标识，treg按推论的%硫酸铜。用抗CD3 /28微珠还原细胞核，培训3天后来进行流式细胞核奥义(CD25反染)和细胞核因次子分析。HD Treg与HD、SP或sp606应将答者共同培训。(a,b) CFSE可抑制(a)和CFSE可抑制百分部将(b)。(c,d) CD25可抑制百分部将(c)和CD134可抑制百分部将(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在五小中所的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们算出的结论是，来自很慢的发展次子的还原清醒CD4+Treg在GITR传达中所获取了扩展和比较丰富，强调了进一步深入研究Treg在1型号乳癌凶险性生物棒状中所的异质性的有效性。

原文引自：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28