Diabetologia：激活但功能受损的梦境Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现造出来肾脏自身抗微到显现造出来1HG冠心病诊疗征状的成效率在青多于年时期就有很好的揭示，多个肾脏自身抗微感染性的青多于年中的有70%在抗微匹配后10年内患上冠心病，而随访15年的青多于年这一分之一提高到84%。相比较之下，占诊疗1HG冠心病一半以上的HG1HG冠心病的发作机制还没赢取充分的研究工作。

越来越多的人开始用作有系统系统来并不一定1HG冠心病的成效：个微在显现造出来多种肾脏自身抗微时带入第1阶段，显现造出来血糖所致时带入第2阶段，显现造出来征状时带入第3阶段。一些多发肾脏自身抗微感染性的个微，在1期和2期，成效较比较慢，并发展为发作的1HG冠心病。我们在此之前揭示了一两组在首次检测到多种肾脏自身抗微样本后至多于10年无冠心病的极比较慢成效者，这两组病征人数多于，但特性比较指明。随后，我们发现肾脏自身免疫选择性CD8+T肝细胞催化在成效缓比较慢的病征中的基本不实际上，但在近期发作和长期实际上的冠心病病征中的很很难检测到。这似乎表明，与成效病征相比较，这些病征自身免疫催化的调节增强。

早期研究工作表明，尽管调节性T肝细胞(Treg)数量造出现所致，但冠心病病征实际上一些功用缺陷，其中的包括对IL-2的催化战斗能力减多于。此外，冠心病病征中的的畸变CD4+T肝细胞似乎对调节更为具抵抗性，展示造出为畸变T肝细胞的诱发增强，自然造成了的Treg和活微造成了的诱发Treg，以及免疫经历的CD4+T肝细胞中的IL-2催化增强。本研究工作的目的是揭示了CD4+调节性T肝细胞(Treg)在一小群极缓比较慢成效者中的的特性，他们的平均成年为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群基础上的中轴研究工作，在21岁以下患病的病征亲属中的检查1HG冠心病的危险考量。我们在此之前揭示了长期缓比较慢成效者的特性，他们保持良好多重肾脏自身抗微感染性最多10年，但没显现造出来冠心病的诊疗征状，比较慢性或非透过性自身免疫。随后，10名暂时保持良好无冠心病并愿意提供大量血液样本的缓比较慢成效者划入T和B肝细胞功用量化。在目前的研究工作中的，8名比较慢成效者(SP两组)，中的位成年43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肾脏自身抗微感染性。所有的与会者都始终保持良好1HG冠心病成效的1期，尽管一些人随后夺去了肾脏自身抗微对某些免疫的感染性催化，然而，一名病征已经始终保持良好2期至多于6年，但没显现造出来诊疗征状，一名病征被诊断为冠心病，该实验者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在科研人员中的对该供微透过了单独评核。剥离外周血单个核肝细胞(PBMCs)，采用多参数流式肝细胞法术和T肝细胞诱发试验评核供微中的Treg的高频率、表HG和功用。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)透过无都由聚类量化，评核Treg表HG。

结果：与健康供微相比较，来自比较慢成效微的知觉CD4+T肝细胞的都由聚类揭示，转录的知觉CD4+ Treg高频率提高，与糖皮质激素诱发的TNFR之外亚基(GITR)理解提高有关。一名HbA1c升高的病征与成效缓比较慢者和匹配的对照两组相比较，Treg明人有所不同。功用量化表明，与健康供微相比较，来自缓比较慢成效微的Treg介导的CD4+畸变T肝细胞诱发相比较损伤。展示造出为对畸变CD4+T肝细胞CD25和CD134理解的诱发提高。

三幅1 深入的表HG量化揭示，CD4+Treg亚HG在比较慢成效链表中的提高。由FlowSOM匹配成的Treg室，聚集在来自所有供微的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标上物理解鉴定造出10个元簇:知觉T肝细胞_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T肝细胞;HLA-DR + GITR +知觉T肝细胞;终点站程Treg_1;终点站程Treg_2;终点站程Treg_3;和终点站程Treg_4。(a)用作9个不同Treg标上匹配成的10个元簇的MST。每个链表代表一个一个大(100个一个大)，非常大的元一个大(10个元一个大)在链表两组周围上色。每个链表中的的饼三幅透露单个标上的理解级别。(b)每个元聚类的热三幅，以揭示整微标上理解。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)匹配成三幅，以及FlowSOM辨别的每个元簇的裂口。(e-l)相对数量级为每个metacluster筒终点站三幅(数量级> 0.05%)具体为HD和SP两组:终点站程Treg_2 (e),终点站程Treg_3 (f),终点站程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T肝细胞(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T肝细胞(l)。粉红色圆点代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检测。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用作CITRUS的预测模HG证实，Treg高频率的提高是成效缓比较慢的标志。国际标准介导(a - f)和柑橘量化(g-k)比较SP与会者和匹配的HD与会者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)性状CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群微的标志性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR理解透过剥离，实时FlowSOM群微。(b) HD(黑点)和SP(布氏)两组以及供微SP 606(粉红色)中的CD25+ cd127的高频率汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+介导子集的筒终点站三幅;(c) HLA-DRloGITR−(终点站程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(终点站程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(终点站程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+终点站程T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度后处理，箭头突造出的簇被辨别为SP和HD链表之间的不同。(j)筒终点站三幅揭示了在SP(布氏)和HD(灰点)两组中的，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相对数量级(分之一)。(k)直方三幅揭示每个簇的表HG(黑色)和Treg标上相对理解与文化背景理解(粉红色);上列，终点站程Treg_3;后面一行，终点站程Treg_4。文化背景与所有其他簇中的标上的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检测

三幅3 与健康献血者相比较，成效缓比较慢者知觉treg的GITR提高。每个知觉CD4+T肝细胞元簇(知觉T肝细胞_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T肝细胞;HLA-DR + GITR +知觉T肝细胞;终点站程Treg_2;终点站程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个理解标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的理解热三幅(sp606不包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR理解串联，揭示直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon配对记号秩和检测，p< 0.07(粉红色)所有供微包括，p< 0.05(粉红色)供微SP 606和匹配的HD不包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR理解，从国际标准介导，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)串联，揭示直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对记号秩检测

三幅4 来自缓比较慢成效的CD4+ treg肝细胞操控畸变CD4+T肝细胞的战斗能力减多于。SP两组用粉红色的终点站和圆点透露，HD两组用黑色的终点站和圆点透露，粉红色的终点站/圆点透露供微sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞透过分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标上为CFSE, Treg按捕捉到的分之一氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠转化肝细胞，培育出3天内透过流式肝细胞法术检测。(a-d)与CD4+需要的话者相对应的treg培育出(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培育出。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE诱发多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发多于。用作感染性对照(转录的组织起来肝细胞不含treg)计算诱发多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 畸变CD4+T肝细胞对缓比较慢成效的T肝细胞转化的诱发更为敏感。SP两组用粉红色的终点站和圆点透露，HD两组用黑色的终点站和圆点透露，粉红色的终点站/圆点透露供微sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞透过分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标上，treg按捕捉到的分之一氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠转化肝细胞，培育出3天内透过流式肝细胞法术(CD25反染)和肝细胞因子量化。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者协力培育出。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE诱发百分率(b)。(c,d) CD25诱发百分率(c)和CD134诱发百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在培育出造出来中的的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得造出的结论是，来自缓比较慢成效子的转化知觉CD4+Treg在GITR理解中的赢取了扩展和丰富，忽视了进一步研究工作Treg在1HG冠心病高风险个微中的的关联性的全面性。

标题造出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28